1. 產(chǎn)品照片 (包括管壁的批次號、管底的二維碼的清晰照片)
2. 請?zhí)峁┠膶嶒灲Y(jié)果并描述出現(xiàn)的問題
注意:
· 請在結(jié)果圖片中標(biāo)注準(zhǔn)確的蛋白marker位置和大小,并標(biāo)注每個泳道的樣品信息;
· 請附上內(nèi)參蛋白的檢測結(jié)果;
· 請用文字語言準(zhǔn)確地描述實驗中出現(xiàn)的問題。
目標(biāo)蛋白出現(xiàn)了兩至三條蛋白條帶,且MDA-MB-231細胞中有表達psma蛋白,但pc3細胞應(yīng)該低表達甚至不表達psma蛋白,卻出現(xiàn)了假陽。
3. 產(chǎn)品儲存 (溫度和分裝)
· 儲存溫度: -20攝氏度
· 是否進行分裝及分裝后每管的體積: 未進行分裝
4. 檢測的樣品
· 樣品種屬信息(Human/Mouse/Rat etc.):Human
· 如果檢測樣品為細胞系,請?zhí)峁┘毎得Q:mda-mb-231細胞,pc3細胞
· 如果檢測樣品為組織,請?zhí)峁┙M織名稱:
· 是全細胞裂解液還是某一亞細胞組分裂解液:全細胞裂解液
5. 裂解液
· 上樣的蛋白總量(μg/lane): 10-15μg
· 裂解緩沖液類型: RIPA裂解液
· 蛋白酶抑制劑:磷酸酶抑制劑混合物,蛋白酶抑制劑混合物
上樣緩沖液成分:
· 煮樣溫度和時間:100攝氏度,10min
6. 電泳和轉(zhuǎn)膜
電泳 :
· 使用變性膠(SDS-PAGE)還是native膠(native-PAGE):SDS-PAGE
· 分離膠濃度:8%
轉(zhuǎn)膜:
· 轉(zhuǎn)膜方法(濕轉(zhuǎn)/半干轉(zhuǎn) etc.):濕法
· 轉(zhuǎn)膜電流/電壓和轉(zhuǎn)膜時間:300mA,2h
· 是否用麗春紅染色檢查過轉(zhuǎn)膜效率?若有,請?zhí)峁嶒瀳D片:否
7. 封閉條件
· 封閉劑成分(脫脂牛奶/BSA etc.)和濃度:5%脫脂牛奶
· 封閉時間和溫度:室溫,2h
8. 一抗
· 一抗稀釋比例:1:1000
· 抗體稀釋液:TBST
· 孵育時間和溫度:4攝氏度,10-12h
· 洗液成分(請注明Tween的含量):TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20
· 洗膜具體步驟:每次10min,洗3次
9. 二抗
· 產(chǎn)品名稱:Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP
· 品牌與貨號:南京翼飛雪生物科技有限公司 YFSA02
· 二抗稀釋比例:1:5000
· 孵育時間和溫度:室溫,2h
· 洗液成分(請注明Tween的含量):TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20
· 洗膜具體步驟:每次10min,洗3次
· 是否與其它一抗搭配使用沒有問題? 如果是, 請?zhí)峁┫嚓P(guān)實驗結(jié)果:與其它一抗搭配使用沒有問題
是
10. 檢測
· ECL/ECL+/其它檢測方法-請說明:ECL
11. 是否使用陽性對照與陰性對照? 如果是,請?zhí)峁┫嚓P(guān)實驗結(jié)果。
12. 請確認靶標(biāo)蛋白在所檢測樣本中的表達情況,并提供相關(guān)參考文獻或數(shù)據(jù)庫信息。
The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.
13. 是否用過其它同指標(biāo)產(chǎn)品? 如果是,請?zhí)峁┢放?、貨號與實驗結(jié)果。
無
14. 優(yōu)化步驟
· 您使用該投訴產(chǎn)品進行過幾次WB:兩次
· 是否每次都遇到相同問題(例如每次背景條帶都在相同位置):是的
· 您已經(jīng)優(yōu)化過哪些步驟:延長封閉時間
廠家郵件回復(fù):
1. 建議嘗試更換封閉液,比如用5%BSA進行封閉:
2. 建議做一個不孵一抗、只二抗的陰性對照,檢測二抗與樣本是否存在非特異性結(jié)合
客戶重新按照廠家的建議做的結(jié)果基本符合實驗要求,售后處理結(jié)束。